ابحث

إيثيلين جلايكول ديجليسيديل إيثر

تحتوي مجموعة الLAMP الحيوي (2×) على خليط تفاعل حيوي للLAMP 2 LAMP (2×) وماء معقم ومخزن مؤقت للتطبيق (6×). تم تصميم خليط التفاعل الحيوي للLAMP 2 LAMP (2×) للتضخيم متساوي الحرارة للحلقة (الLAMP) مع التحكم اللاحق في التفاعل في الجل. يحتوي الLAMP الحيوي (2×) على جميع مكونات التفاعل الضرورية (باستثناء مصفوفة الحمض النووي والبادئات): - المتنحية للغاية المؤتلف جزء كبير (لف) من بست بوليميراز الحمض النووي; Mixture خليط من ثلاثي فوسفات ديوكسينوكليوسيد; ● العازلة; - مغ 2+ (6 مم). تم تحسين الخليط لإجراء LAMP فعال وقابل للتكرار مع عينات من الحمض النووي الجينومي والبلازميد والفيروسي. يحتوي الخليط على إضافات تزيد من عمر النصف وعملية بوليميراز الحمض النووي بست لف عن طريق زيادة ثباته أثناء التفاعل. يوفر الشكل المقدم لمجموعة تفاعل البوليميراز المتسلسل الوقت ويقلل من احتمالية التلوث بسبب قلة عدد خطوات الماصة. المخزن المؤقت 6×لتطبيق هلام يسهل إعداد عينة للتحليل في هلام والسيطرة على مسار الكهربائي.

تم تصميم المجموعة لعزل وتنقية الحمض النووي من العينات التالية: 1. مزارع خلايا الثدييات 2. مزارع الخلايا للبكتيريا سالبة الجرام وإيجابية الجرام يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء ثاني أكسيد السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. يحدث تحلل العينة في وجود بروتيناز ك. يمكن استخدام الحمض النووي المعزول في تفاعل البوليميراز المتسلسل ، وترجمة نيك ، والتسلسل ، وما إلى ذلك.

محلول بروميد الإيثيديوم (3 ، 8-ديامينو-5-إيثيل-6-فينيل فينانثريديوم بروميد) لتصور الأحماض النووية بعد الرحلان الكهربائي لهلام الاغاروز. تم تحضير المحلول باستخدام ماء من النوع الأول وتصفيته من خلال غشاء بحجم مسام 0.22 ميكرون.

تم تصميم المجموعة لعزل وتنقية الحمض النووي من العينات التالية: 1. دم كامل مأخوذ في أنابيب يمكن التخلص منها مع مضادات التخثر التالية: ك 3 إدتا ، سيترات الصوديوم 3.2 ٪ و 3.8٪ ، كبدا، هيبارين الصوديوم; 2. بلازما الدم; 3. مصل الدم; 4. الراسب القري; 5. كتلة الكريات البيض ؛ 6. السائل النخاعي. يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء ثاني أكسيد السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. يحدث تحلل العينة في وجود بروتيناز ك. الحمض النووي معزولة يمكن استخدامها لترجمة ير و نيك.

تم تصميم هذه المجموعة للنسخ العكسي اللوني (RT) والتضخيم متساوي الحرارة حلقة (LAMP) في أنبوب واحد. غ-LAMP-لون BioMaster كيت (2)) يحتوي على 2 buffer العازلة ل غ-LAMP-اللون; 25 mix غ-LAMP BioMaster ميكس, المياه والمعالجة ديبك. يحتوي المخزن المؤقت 2 LAMP رت-LAMP اللون على جميع مكونات التفاعل الضرورية (باستثناء الإنزيمات ومصفوفة الحمض النووي والبادئات): مكون عازلة بسعة منخفضة ؛ خليط من ثلاثي فوسفات ديوكسينوكليوسيد ؛ ملغ2+ أيونات (6 مم) ، صبغة مؤشر. 25 LAMP رت-LAMP BioMaster ميكس يتضمن RNAscribe RT ريفرتاس و LF Bst بوليميريز الحمض النووي في نسبة مثالية لكلا ردود الفعل. رناسكريب رت هو نسخة عكسية معدلة وراثيا (ريفرتيز) من فيروس سرطان الدم الماوس (M-MuLV). يظهر الإنزيم نشاط البوليميراز المعتمد على الحمض النووي الريبي والحمض النووي ويظهر النشاط الأمثل عند 55 C ج (نشط حتى 65 C ج).

تم تصميم الكاشف لضمان سلامة الحمض النووي الريبي في الأنسجة والخلايا. بعد الجمع ، يتم وضع العينات (شظايا الأنسجة أو رواسب الخلايا) على الفور في مثبت الحمض النووي الريبي ، ويخترق الكاشف الأنسجة والخلايا ، مما يضمن سلامة الحمض النووي الريبي. يتم تخزين العينات في مثبت الحمض النووي الريبي لمدة 1 يوم على الأقل في 37 C ج ، على الأقل 1 أسبوع في 15-25 C ج ، على الأقل 1 شهر في 2-8 C ج ، على الأقل 1 سنة في -20 C ج دون انخفاض ملحوظ في نوعية الحمض النووي الريبي.

تم تصميم المجموعة لعزل وتنقية الحمض النووي والحمض النووي الريبي (من 50 إلى 10000 نيوتن متر) من مخاليط التفاعل. تنقية ممكنة ، على سبيل المثال ، من دنتب ، والإنزيمات ، منخفضة الوزن الجزيئي المشعة والتسميات الفلورسنت التي لم يتم تشغيلها ، وما إلى ذلك. يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. تنقية ما يصل إلى 10-20 ميكروغرام من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي ممكن. حجم عينة خليط التفاعل لكل 1 فصل يصل إلى 100 µ يمكن استخدام الحمض النووي المعزول والحمض النووي الريبي في تفاعل البوليميراز المتسلسل والنسخ وترجمة نيك والتسلسل وتطبيقات الهندسة الوراثية الأخرى. لا تحتوي المجموعة على الفينول وأملاح تشوتروبيك مثل ثيوسيانات غوانيدين ، إلخ.

بوليميريز الحمض النووي الانصهار هو بولي ببتيد المؤتلف تتكون من تنصهر مستقرة حراريا بوليميريز الحمض النووي بيروكوكوس فوريوسوس (Pfu) والبروتين الحمض النووي ملزمة من العتائق المحبة للحرارة من الأنواع سولفولوبوس سولفاتاريكوس (Sso 7d). يرتبط بروتين سو 7 دي بالأخدود الصغير للحمض النووي المزدوج الشريطة ويثبت مركب البوليميراز مع المصفوفة. ونتيجة لذلك ، زاد بوليميراز الحمض النووي الانصهار من قابلية المعالجة ، ودقة التوليف ، ومعدل تضخيم الشظايا وزيادة المقاومة لمثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل مقارنة ببوليميراز الحمض النووي الأصلي [1]. يحتوي بوليميراز الحمض النووي الانصهار على نشاط بوليميريز 5'3 3' ، ونشاط نوكلياز خارجي 3'5 5' ويقوم بتجميع المنتجات ذات النهايات الحادة.

M-MuLV –RH هو نسخة عكسية معدلة وراثيا (ريفرتيز) من فيروس سرطان الدم الماوس (M-MuLV). وهو يختلف عن البرية من نوع م مولف في هيكلها ، والخصائص التحفيزية ، ودرجة الحرارة النشاط الأمثل. يظهر الإنزيم نشاط البوليميراز المعتمد على الحمض النووي الريبي والحمض النووي ، ولكنه يخلو من نشاط الرناز. M-MuLV –RH المعارض النشاط الأمثل في 42 C ج (نشط تصل إلى 50 C ج). الانزيم قادر على توليف أول سلسلة كدنا تصل إلى 7 ر. س. طويلة وتشمل قواعد معدلة. وتشمل المجموعة أيضا مزيج عازلة 5t أوت الذي يحتوي على جميع المكونات اللازمة لتشغيل ريفرتيز ، باستثناء الاشعال ومصفوفة الحمض النووي الريبي. تم تحسين تكوين المخزن المؤقت لتفاعل النسخ العكسي الفعال من مجموعة واسعة من مصفوفات الحمض النووي الريبي.