ابحث

تم تصميم المجموعة لعزل وتنقية الحمض النووي من العينات التالية: 1. دم كامل مأخوذ في أنابيب يمكن التخلص منها مع مضادات التخثر التالية: ك 3 إدتا ، سيترات الصوديوم 3.2 ٪ و 3.8٪ ، كبدا، هيبارين الصوديوم; 2. بلازما الدم; 3. مصل الدم; 4. الراسب القري; 5. كتلة الكريات البيض ؛ 6. السائل النخاعي. يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء ثاني أكسيد السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. يحدث تحلل العينة في وجود بروتيناز ك. الحمض النووي معزولة يمكن استخدامها لترجمة ير و نيك.

تم تصميم هذه المجموعة للنسخ العكسي اللوني (RT) والتضخيم متساوي الحرارة حلقة (LAMP) في أنبوب واحد. غ-LAMP-لون BioMaster كيت (2)) يحتوي على 2 buffer العازلة ل غ-LAMP-اللون; 25 mix غ-LAMP BioMaster ميكس, المياه والمعالجة ديبك. يحتوي المخزن المؤقت 2 LAMP رت-LAMP اللون على جميع مكونات التفاعل الضرورية (باستثناء الإنزيمات ومصفوفة الحمض النووي والبادئات): مكون عازلة بسعة منخفضة ؛ خليط من ثلاثي فوسفات ديوكسينوكليوسيد ؛ ملغ2+ أيونات (6 مم) ، صبغة مؤشر. 25 LAMP رت-LAMP BioMaster ميكس يتضمن RNAscribe RT ريفرتاس و LF Bst بوليميريز الحمض النووي في نسبة مثالية لكلا ردود الفعل. رناسكريب رت هو نسخة عكسية معدلة وراثيا (ريفرتيز) من فيروس سرطان الدم الماوس (M-MuLV). يظهر الإنزيم نشاط البوليميراز المعتمد على الحمض النووي الريبي والحمض النووي ويظهر النشاط الأمثل عند 55 C ج (نشط حتى 65 C ج).

تم تصميم الكاشف لضمان سلامة الحمض النووي الريبي في الأنسجة والخلايا. بعد الجمع ، يتم وضع العينات (شظايا الأنسجة أو رواسب الخلايا) على الفور في مثبت الحمض النووي الريبي ، ويخترق الكاشف الأنسجة والخلايا ، مما يضمن سلامة الحمض النووي الريبي. يتم تخزين العينات في مثبت الحمض النووي الريبي لمدة 1 يوم على الأقل في 37 C ج ، على الأقل 1 أسبوع في 15-25 C ج ، على الأقل 1 شهر في 2-8 C ج ، على الأقل 1 سنة في -20 C ج دون انخفاض ملحوظ في نوعية الحمض النووي الريبي.

التطبيق. يُستخدم CRM197 البروتين المؤتلف كبروتين حامل في لقاحات عديد السكاريد المقترنة: لقاح المكورات العقدية الرئوية (بريفنار) ضد النزلة النزفية من النوع ب (HibTITER و Vaxem-Hib) واللقاح ضد السحايا النيسرية والسحائية المصلية W-135. أصل البروتين. يتم الحصول على CRM197 البروتين المؤتلف في خلايا الإشريكية القولونية. النقاء: أكثر من 95٪ - وفقًا لبيانات الغسالة الكهربائية في هلام البولي أكريلاميد (PAAG) مع دوديسيل كبريتات الصوديوم (DSN) في ظل ظروف متجددة وغير متجددة. شكل الإطلاق: مسحوق ليوفيزيلي أو أقراص كتلتها 1 ملغ، 10 ملغ، 100 ملغ. ظروف التخزين: عند درجة حرارة لا تزيد عن 25 درجة مئوية تحت الصفر.

تم تصميم المجموعة لعزل وتنقية الحمض النووي والحمض النووي الريبي (من 50 إلى 10000 نيوتن متر) من مخاليط التفاعل. تنقية ممكنة ، على سبيل المثال ، من دنتب ، والإنزيمات ، منخفضة الوزن الجزيئي المشعة والتسميات الفلورسنت التي لم يتم تشغيلها ، وما إلى ذلك. يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. تنقية ما يصل إلى 10-20 ميكروغرام من الحمض النووي أو الحمض النووي الريبي ممكن. حجم عينة خليط التفاعل لكل 1 فصل يصل إلى 100 µ يمكن استخدام الحمض النووي المعزول والحمض النووي الريبي في تفاعل البوليميراز المتسلسل والنسخ وترجمة نيك والتسلسل وتطبيقات الهندسة الوراثية الأخرى. لا تحتوي المجموعة على الفينول وأملاح تشوتروبيك مثل ثيوسيانات غوانيدين ، إلخ.

بوليميريز الحمض النووي الانصهار هو بولي ببتيد المؤتلف تتكون من تنصهر مستقرة حراريا بوليميريز الحمض النووي بيروكوكوس فوريوسوس (Pfu) والبروتين الحمض النووي ملزمة من العتائق المحبة للحرارة من الأنواع سولفولوبوس سولفاتاريكوس (Sso 7d). يرتبط بروتين سو 7 دي بالأخدود الصغير للحمض النووي المزدوج الشريطة ويثبت مركب البوليميراز مع المصفوفة. ونتيجة لذلك ، زاد بوليميراز الحمض النووي الانصهار من قابلية المعالجة ، ودقة التوليف ، ومعدل تضخيم الشظايا وزيادة المقاومة لمثبطات تفاعل البوليميراز المتسلسل مقارنة ببوليميراز الحمض النووي الأصلي [1]. يحتوي بوليميراز الحمض النووي الانصهار على نشاط بوليميريز 5'3 3' ، ونشاط نوكلياز خارجي 3'5 5' ويقوم بتجميع المنتجات ذات النهايات الحادة.

M-MuLV –RH هو نسخة عكسية معدلة وراثيا (ريفرتيز) من فيروس سرطان الدم الماوس (M-MuLV). وهو يختلف عن البرية من نوع م مولف في هيكلها ، والخصائص التحفيزية ، ودرجة الحرارة النشاط الأمثل. يظهر الإنزيم نشاط البوليميراز المعتمد على الحمض النووي الريبي والحمض النووي ، ولكنه يخلو من نشاط الرناز. M-MuLV –RH المعارض النشاط الأمثل في 42 C ج (نشط تصل إلى 50 C ج). الانزيم قادر على توليف أول سلسلة كدنا تصل إلى 7 ر. س. طويلة وتشمل قواعد معدلة. وتشمل المجموعة أيضا مزيج عازلة 5t أوت الذي يحتوي على جميع المكونات اللازمة لتشغيل ريفرتيز ، باستثناء الاشعال ومصفوفة الحمض النووي الريبي. تم تحسين تكوين المخزن المؤقت لتفاعل النسخ العكسي الفعال من مجموعة واسعة من مصفوفات الحمض النووي الريبي.

يتمتع الإنزيم بدقة عالية ومعدل خطأ منخفض للغاية ، مما يجعله أداة لا تقدر بثمن في البيولوجيا الجزيئية للاستخدام في طرق مختلفة.

في عملية العزلة ، يتم الحفاظ على سلامة الحمض النووي الريبي. تعتمد سلامة الحمض النووي الريبي المعزول على ظروف التخزين والاستلام ونوع العينة. عند العمل مع عينات قابلة للتحصيل أو مع عينات ذات مرحلة عالية من التدهور ، من الممكن عزل الحمض النووي الريبي المجزأ فقط بسبب تدهوره في مثل هذه العينات.

يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للحمض النووي والحمض النووي الريبي من عينة مذابة مسبقا على غشاء ثاني أكسيد السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى.

يعتمد مبدأ تشغيل المجموعة على الامتصاص الانتقائي للأحماض النووية من عينة مسبقة التحلل على غشاء ثاني أكسيد السيليكون ، والغسيل والشطف اللاحقين للمنتج المنقى. يمكن استخدام الحمض النووي المعزول لمختلف الدراسات البيولوجية الجزيئية: ير ، ير-رف ، نيك الترجمة ، التسلسل ، التنميط الجيني ، تحليل سنب ، الخ. يمكن عزل الحمض النووي بأحجام تصل إلى 1000 نقطة أساس من هذه المجموعات . ملحوظة: لا يزيد تركيز الشظايا الطويلة عادة عن 10 ٪ من إجمالي كمية الحمض النووي المعزول